ACE阻害活性はACE Kit-WST (DOJINDO laboratories)を用いて使用説明書に従って測定した。測定後ACE阻害活性値を求め、阻害率50％に相当するACE阻害活性IC50を求めた。 【結果】 【はじめに】 エクソソームは細胞から分泌される直径50～150 nmの顆粒状の物質で、その表面は細胞膜由来の脂質、蛋白質を含み、内部には核酸や蛋白質など細胞内の物質を含んでいる。糖鎖は多くの場合、細胞表面に存在しているため、エクソソームの表面にも糖鎖が存在し、個々の細胞に特異的な情報伝達や細胞間コミュニケーションなどの機能と役割を果たしていると言われている。例えば糸球体細胞から尿中に放出されたエクソソームが尿細管や膀胱などの細胞に取り込まれて何らかの制御に寄与している可能性がある。つまりエクソソームに含まれる糖鎖の分析によりこの何らかの制御に関する情報が得られると考えられる。 そこで本研究では尿エクソソームに含まれる蛋白質の糖鎖についてレクチンブロット法を用い解析を試みたところ、2，3の知見が得られたので報告する。 【対象】 同意の得られた本学検査技術科学専攻の学生の随時尿を用いた。 【はじめに】 血圧上昇に大きく関与している酵素として、アンジオテンシンⅠ変換酵素(ACE)が知られている。ACEは血圧調節メカニズムの一つであるレニン-アンジオテンシン系において、アンジオテンシンⅠから昇圧作用を有するアンジオテンシンⅡを生成し、同時に降圧ペプチドであるブラジキニンを分解するなど、血圧上昇に大きく関与している。近年、高血圧予防を目的とした数多くの機能性食品（機能性表示食品、特定保健用食品）が販売されるなど、ACE阻害作用を有する食品成分が注目を集めている。 今回試料として用いる「黒酢」は、鹿児島県霧島市福山町でおよそ200年前から独自の製法で作られている黒酢である。米酢は約3ヵ月前後で作られるのに対して、黒酢は1～3年間もの長い時間をかけて、ひとつの壺の中で発酵・熟成される。黒酢は健康食品として古くから親しまれており、これまで様々な機能性が報告されている。 本研究では黒酢の様々な機能性のうち、血圧降下作用について解析することを目的とした。特にACE阻害作用に着目◎北原早紀1）、白田未来1）、阪野汐菜1）、久保田亮2）◎北原 早紀1)、白田 未来1)、阪野 汐菜1)、久保田 亮2) 埼玉県立大学保健医療福祉学部健康開発学科検査技術科学専攻1）、埼玉県立大学保健医療福祉学部2）埼玉県立大学 保健医療福祉学部 健康開発学科 検査技術科学専攻1)、埼玉県立大学 保健医療福祉学部2) ◎関穂乃花1）、岡田明也1）、久保田亮2）◎関 穂乃花1)、岡田 明也1)、久保田 亮2) 埼玉県立大学 保健医療福祉学部 健康開発学科 検査技術科学専攻1)、埼玉県立大学 保健医療福祉学部2) 埼玉県立大学保健医療福祉学部健康開発学科検査技術科学専攻1）、埼玉県立大学保健医療福祉学部2）尿エクソソームに含まれる蛋白質の糖鎖解析 黒酢中の血圧降下作用成分の解析 【方法】 対象の尿についてTotal Exosome Isolation Reagent (from urine)キット (Invitrogen)を用い、エクソソームを単離した。エクソソーム単離後、Exosome Resuspension Bufferを用い、再懸濁化した液を試料とした。この試料をニトロセルロース膜に点着し、ブロッキングを行った後、それぞれ15種類のレクチンを用いて糖鎖解析を行った。膜を乾燥後ImageJ (NIH)を用いて濃淡の解析を行った。 【結果】レクチンブロット法を行ったところ、尿エクソソームに含まれる蛋白質の糖鎖と反応したレクチンのうち、反応性が良好であったものはPHA-E4、ConAであった。つまりマンノースを含む二本鎖糖鎖が多く含まれていることが示唆された。 【まとめ】 尿エクソソームに含まれる蛋白質の糖鎖を解析することで、様々な腎疾患に特異的な細胞間コミュニケーションについて探ることができるのではないかと考える。 連絡先 048-973-4799 して検討を行った。 【試料】 解析に用いた試料は日本薬品株式会社から提供を受けた壺の中で熟成され製造された黒酢及び市販の黒酢(ミツカン)を用いた。 【方法】 それぞれの黒酢の原液を100％として、ACE阻害活性IC50算出法に基づき計算したところ、壺製造の黒酢は0.53%、市販の黒酢は0.42%であった。壺製造の黒酢、市販の黒酢どちらもACE阻害活性があることが分かった 【まとめ】 黒酢にはACE阻害活性があることが示されたが、黒酢の中のどの成分がACE阻害活性を示すか今後検討していきたい。 連絡先：048（973）4799 134学生演題学生演題学般-3（第7会場 9:30～09:57）学化-1（第7会場 9:58～10:20）尿エクソソームに含まれる蛋白質の糖鎖解析黒酢中の血圧降下作用成分の解析
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